CHX是灰链霉菌的居品,持续用于检测卵白质或酶的半衰期。CHX禁绝细胞总卵白合成的旨趣是阻断真核细胞核糖体易位经过。用允洽浓度的CHX搞定细胞(经常为100μg/mL)不同技术点,齐集细胞样品进行WB施行检测卵白质丰采。
半衰期短的卵白质会跟着时分的推移飞速降解,而半衰期长的卵白质跟着时分的推移,降解的很少。
CHX常用于检测卵白质的踏实性和半衰期。鄙人面这个案例中,用50μg/mL的CHX搞定6h和12h,WB检测卵白抒发,发现敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解。
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小程序开发敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解(Ying Miao et al. 2023. bio protocol)
龙头:最近10期出号 06 04 02 01 03 07 03 03 01 05,其中奇数球开出7个,偶数球开出3个,本期推荐偶数球:04。
值得一提的是,这也意味着阿根廷队已连续三届大赛打入决赛。分别是:2021年的美洲杯,阿根廷1比0击败巴西夺冠;2022的年世界杯,阿根廷在点球大战中击败法国捧起了大力神杯。
还不知说念检测卵白质踏实性和半衰期步调的家东说念主不错先望望往期著作:《卵白质踏实性、半衰期施行的旨趣、步协调运用》
MG132又称苄氧羰基-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸,是一种多肽醛。MG132是行家熟知的卵白酶体禁绝剂,MG132的作用机制是通过与卵白酶体20S催化中枢的活性位点苏氨酸残基中的羟基半缩醛响应,从而禁绝卵白酶体活性。
鄙人面这个案例中,使用MG132大要禁绝卵白质的泛素化降解,促进泛素化卵白的积存,从而更容易检测到卵白质的泛素化。如下图的图C所示:在不添加MG132时,甘肃省物联网软件开发即使Bmi-1和Ezh2能被泛素化,也可能会飞速降解,从而检测不到信号,MG132搞定禁绝卵白酶体,导致泛素化的卵白积存,因此更容易检测到泛素化的卵白。
需要颠倒提防的是,如下图A和B所示,在不添加MG132时,可能检测不到ub信号。
需要泛素化质粒的不错干系小编。
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MG132促进卵白质泛素化(Sivaprakasam B et al. 2012. J Biol Chem)
另外,CHX和MG132也大要勾通起来考证卵白质的踏实性和降解道路。举例鄙人面这个案例中,左边是MG132和CHX连合搞定,右边是只用CHX搞定,w/o MG132默示 without MG132。阐发MG132增多了a-SMN卵白的踏实性,而MG132莫得增多FL-SMN的卵白踏实性。
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MG132对a-SMN和FL-SMN卵白半衰期的影响(Denise Locatelli et al. 2015. PLOS ONE)
行家不错把柄我方的施行标的机动聘任禁绝剂单独搞定或连合搞定物联网软件开发公司,从而更成心于发现问题地点,更好的分析成果。
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