嘌呤霉素抑制蛋白合成的原理：

嘌呤霉素（puromycin）和氨酰-tRNA分子3'末端的结构类似，能够与核糖体的A位点结合，从而被添加到新合成的肽链中去。puromycin和核糖体的A位点结合然后掺入延伸的肽链之后，则无法继续参与随后的肽链延伸反应，导致蛋白质合成的提前终止，然后释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽（如下图红色部分所示）。因此，向细胞中添加puromycin会抑制细胞内所有的蛋白质合成。

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嘌呤霉素抑制蛋白合成原理（图片来源于www.cellco.com）

含有puromycin的不成熟的多肽可以被针对puromycin的抗体识别，因此可以通过WB或者IFA检测细胞内总的蛋白质合成情况，或者翻译抑制情况。

puromycin抗体检测蛋白翻译抑制案例详解：

（1）puromycin抗体WB法

如下图所示，作者用鼠诺如病毒（murine norovirus，MNV）感染骨髓来源的巨噬细胞，分别于感染后的3h、6h、9h、12h和15h收样，每次收样前用10 ug/ml的puromycin处理20min，目的是让puromycin掺入到新和成的多肽中去，然后就能用puromycin的抗体检测新和成的多肽了。结果显示，随着感染时间延长，puromycin抗体能够检测到的蛋白含量逐渐降低，说明新和成的蛋白减少了，也就是证明MNV感染抑制了蛋白翻译。

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鼠诺如病毒感染抑制宿主蛋白翻译（Svenja Fritzlar et al. 2019. mBio）

（2）puromycin抗体IFA法

puromycin的抗体除了可以做WB，也可以通过做IFA来检测细胞蛋白翻译抑制。作者同样是用MNV感染，分别于感染后的6h、9h和12h固定细胞，固定前用10 ug/ml的puromycin处理30min。

如下图所示，anti-puromycin检测的是新和成的多肽，anti-VPg标记被MNV感染的阳性细胞。尤其是MNV感染12hpi时，物联网软件开发价格MNV阳性的细胞（红色）中puromycin的信号降低，说明MNV感染的细胞中蛋白翻译被抑制。

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鼠诺如病毒感染抑制宿主蛋白翻译（Svenja Fritzlar et al. 2019. mBio）

puromycin抗体筛选蛋白翻译抑制因子：

为了筛选MNV编码的蛋白翻译抑制因子，作者将MNV编码的基因转染到HEK-293T细胞中，用10 ug/ml的puromycin处理20min，收样WB用puromycin抗体检测蛋白翻译情况，结果显示NS3能够抑制宿主蛋白翻译。

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同样的，将MNV编码的基因转染到Vero细胞中，用10 ug/ml的puromycin处理30min，然后用puromycin抗体染色检测蛋白翻译情况，结果显示NS3能够抑制宿主蛋白翻译，因为NS3阳性细胞（红色）中puromycin信号（绿色）是降低的。

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